Orden Boletales

• Tubos
• Basidios y basidiolos
• Cistidios
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Pocas son las diferencias microscópicas en el Orden Boletales y mucho menos entre los géneros que los componen. El carácter mas importante para diferenciar las especies es la pared esporal y para ello es necesario un microscopio de los llamados de alta gama, o los de barrido electrónico. Aunque sean pocas las diferencias microscópicas, y la determinación de las especies este más bien basado en los caracteres macroscópicos y reactivos químicos, aquí también nos va a ser de utilidad el microscopio

Si intentamos separar macroscópicamente Xerocomus rubellus de Xerocomus ripariellus nos va a resultar en la mayoría de los casos prácticamente imposible por el gran parecido existente entre ellos, por lo que no conseguiremos una determinación correcta sin obsérvalos con el microscopio, con el comprobaremos que Xerocomus rubellus tiene la pared esporal lisa, en cambio en Xerocomus ripariellus la pared esporal es finamente estriada longitudinalmente. Otra especie que nos puede servir de ejemplo es Xerocomus porosporus un simple vistazo con el microscopio y comprobaremos que las esporas tienen el extremo apical truncado con poro germinativo, esto nos hará separarlo de las muchas especies próximas del género como Xerocomus pruinatus.

Caracteres microscópicos Esporas: Por los general suelen presentar una forma de elíptica alargada a fusiforme, con paredes gruesas y lisas, aunque existen casos como el de Strombilomyces strobilaceus que las tiene de globosas a subglobosas con la superficie crestada reticulada, en Xerocomus pipariellus, X. pruinatus y X. cisalpinus las esporas son rayadas.

Esferico-ovoide a elipsoidales en Rubinoboletus rubinus. Globosas a subglobosas, reticuladas en Strombilomyces strobilaceus. Elipsoidales como en algunos Boletus (B. satanas, B. lupinus, etc.). Fusiformes a largamente elípticas como la mayoría de Leccinum. El tamaño de las esporas en el orden Boletales oscila de las mas pequeñas 5 a 8 micras de Gyrodon lividus hasta las 20-22 micras de algunos Leccinum. Debemos tener presente que las medidas esporales probablemente pueden variar sensiblemente en función de las condiciones ambientales y lugar de fructificación (Snell y Dick 1941).

Para medir las esporas es recomendable realizar esta medición a partir de esporada, de esta manera evitaremos medir esporas demasiado pequeñas o de tamaños aberrantes, se deben observar sobre KOH al 3% y en un tiempo no superior a 5 minutos ya que las esporas se pueden hinchar (Singer 1.965).

Basidios: Se encuentran como los cistidios en la pared tubular del himenoforo y generalmente presentan cuatro esporas, aunque en casos excepcionales podemos encontrarlos con 1 o 2 esporas (Boletus edulis), son de forma claviformes a ligeramente cilíndricos, igual que los basidiolos. Con escasa importancia para la identificación de especies.

Cistidios:
Son las células estériles, que se encuentra en el himenoforo, son muy abundantes y se encuentran bien diferenciados de los basidios y basidiolos (distinguibles porque son más grandes que estos).
Son hialinos en la mayoría de las especies, no tiene incrustaciones salvo en Chalciporus piperatus que posee pequeños cristales en el ápice.
Los cistidios de los Suillus son inicialmente hialinos pero en la madurez toman un color marrón ocre (vistos con potasa al 3%) y están cubiertos de una gruesa capa que se fragmenta. Tienen generalmente la pared delgada (aunque los cistidios de B. calopus tienen las paredes gruesas). Son de forma muy variable como en los Suillus y algunas especies de Xerocomus en los cuales tienen forma cilíndrico claviforme y como en los Boletus y Leccinum en los cuales tienen forma fusiforme, ventricosa, lageniforme, mucronados o en tetina e incluso con el ápice muy alargado. Hasta nos los encontraremos con forma piriforme como las especies de la Sección Appendiculati. Según su posición si se encuentra en las paredes del tubo los llamaremos pleurocistidios y si están en el borde del tubo (poro) los llamaremos queilocistidios. En los Boletus prácticamente no se encentran diferencias entre los pleuros y los queilos.

Trama del himenoforo
Existen dos tipos de tramas principales:
- Trama divergente o bilateral con el mediostrato poco marcado y con las hifas de la trama lateral incurvadas, típicas de los géneros Leccinum, Boletus, Chalciporus, Porphyrellus, Buchwaldoboletus, Suillus y Tylofilus.
Trama del himenoforo Existen dos tipos de tramas principales.
- Trama paralela o regular (Tipo Phylloporoide) con el mediostrato bien marcado y con las hifas de la trama paralela o muy poco divergentes típicas en los géneros Xerocomus y Phylloporus.

Mediostrato = (porción central de una trama en los boletales)
Es recomendable mirar la pileipellis de ejemplares jóvenes (Singer, 1965) y obtener la muestra de la parte central de píleo entre el disco y el margen (Ladurner et Simonini, 2003).

Pileipellis: El medio de observación más recomendado es KOH al 3% con que podremos observar la ornamentación de las hifas si existe en ellas. La cutícula suele presentar varias capas pero la que nos servirá para el estudio es la suprapellis que generalmente tiene hifas entremezcladas en tricodermis terminando en células cilíndricas alargadas, también aquí existen casos distintos como el de Xerocomus depilatus que presenta estructuras himenodermicas con células globosas o en Xerocomus rubellus con hifas con incrustaciones.

Existen dos tipos de estructuras pileicas. Cutis hifas tumbada y paralelas a la superficie pileica, en muchos caso puede presentarse este tipo de estructuras en ejemplares adultos, han podido estar inicialmente erecta en los ejemplares jóvenes, suelen estar acompañadas de una película gelatinosa o viscosa denominándose ixocutis típica del género Suillus. Tricodermis constituida por hifas paralelas a subparalelas incluso verticales, mucho o poco entrelazadas, también puede estar acompañado de una película gelatinosa o viscosa que denominaremos ixotrichodermis:
Estas estructuras están formadas por hifas de distinto tipo:

Hifas filamentosas:
- hifas alargadas y poco septadas en general cilíndricas con artículos cuyo cociente entre longitud y anchuras es mayor de 4 micras, (ejemplos: Leccinum scabrum, Boletus luteocupreus).
Cilindrocistos
- hifas más cortas y cilíndricas cuya anchura es inferior a 4 micras (ejemplos: Leccinum brunneo- griseollum, Leccinum variicolor).
Esferocitos:
- hifas muy cortas esféricas cuya anchura es inferior a 1,5 micras (ejemplos: Leccinum carpini, Leccinum crocipodium).
Elementos himeniformes:
Las hifas de la pileipellis son delgadas en casi todas las especies de los género Suillus y Boletus y es más gruesa en casi todas las especies del genero Leccinum (Suillus variegatus también tiene paredes gruesas). En las paredes se observaran si tienen incrustaciones o pigmentos, en los Boletus existen hifas fuertemente incrustadas y en muchos Xerocomus formando placas más o menos gruesas sobre todo del grupo X. chrysentheron y con incrustaciones finas en Boletus y Suillus. Existen hifas con fíbulas (dato significativo que nos ayudara a separar géneros) en Boletinus, Gyrodon y Gyroporus. hifas con aspecto himeniformes cilindraceos como en Xerocomus depilatus.
- Estructuras con elementos himeniales (caulohimennio) formada por caulobasidios fértiles, caulobasidiolos y cistidios (géneros Boletus y Leccinum).

Estipipellis: A tener en cuenta en su estudio si es fértil o no y a matizar y no olvidar que es la parte alta del pie (la más cercana al himenio) la que se observa (algunas veces dicha parte llega hasta la mitad del pie). En algunos Boletus y Leccinum la superficie del pie es fértil, el retículo no es otra cosa que la prolongación de los poros del himenio, se llama caulohimenio y está formada por caulobasidios, caulobasidiolos y caulocistidios (idénticos a los que encontramos en el himenio tubular). En otros esta superficie es estéril y esta diferenciación es considerada como un importante valor taxonómico (Sutara 1987 1989). Existen tres tipos de estipipellis en función de la parte exterior.
- Estructuras con elementos himeniales poco desarrollados y en general cilíndricos y claviformes (parte del género Xerocomus y también en Suillus).
- Estructuras sin elementos himeniales, de hifas poco diferenciadas (género Gyroporus).

Caulocistidios: En Suillus son claviformes, dispuestos en racimos, pigmentados de marrón a marrón oscuro y en muchos casos con incrustaciones. Boletus flavosanguineus tiene la superficie del estipe estéril y esta formada por elementos típicamente piliformes. Tomando como referencia los estudios de esterilidad de la superficie del pie, Sutara (1987 – 1991) separa Boletinus (superficie estéril) de Suillus (superficie fértil). Además divide las estructuras de la cutícula del pie en varios tramos, el caulohimenio, el caulosubhimenio el estrato lateral y la trama del estipe (datos que no utilizaremos pero que se deben de conocer). Para determinar el género Leccinum se basa en el estudio de la estructura y disposición de superficie de la estipipellis así para los Boletus en general las hifas del caulosubhimenio están claramente entremezcladas y dispuestas en una capa gelatinosa y la trama del estipe es además claramente paralela. Por contrario en el género Leccinum las hifas del caulosubhimenio están dispuestas de forma paralela al eje longitudinal del estipe, de este modo propone que Boletus depilatus y Boletus fragans se incluyan en el género Leccinum.

QUIMICA:
A observar con el reactivo de Melzer las hifas internas del pie. Ayuda a separar algunas especies próximas entre sí de Boletus ss.str. (B. luridus con hifas amiloides y B. erythropus con hifas sin reacción al reactivo). Solo añadir que para la observación microscópica se usa principalmente: agua, amoniaco o KOH al 3% y Rojo Congo amoniacal.

Técnicas microscopias:
Procedimiento amonio-acetico de Locquin. Consiste en coger un pequeño trozo de lámina o una preparación de esporada y ponerla en un portaobjetos, añadir una o dos gotas de amoniaco y calentarla lentamente hasta la evaporación de dichas gotas, así un par de veces más. A continuación se añade una gota de acido acético y se observa al micro. Si la reacción es positiva, el exosporio (la pared externa de las esporas) debe de doblar su tamaño o más. Mientras que si es nula el exosporio queda inalterable.

Corte de los tubo para su observación:
Podremos realizar dos tipos de cortes para la observación de los elementos que contiene los tubos, uno longitudinal o paralelo al tubo y otro transversal o paralelo a los poros
El corte que mas nos interesa es el transversal ya que como hemos visto los elementos que nos interesan ver suelen encontrarse en la parte interna del tubo y a la hora de colocarlos sobre el portaobjetos nos resultara más fácil.
Si realizamos el corte paralelo a los tubos debemos tener la precaución que al colocar la muestra nos quede en la posición correcta para que las hifas de la trama no se superpongan y nos tape los elementos que queremos ver.
El corte transversal también no permitirá ver la trama de los tubos.
Si obtenemos la muestra de exicatas realizaremos el corte transversal en seco, intentando hacerlo lo mas fino posible, para ello utilizaremos una cuchilla nueva o bien afilada
Colocaremos la muestra sobre el cubre objetos y rehidrataremos.
Cuando son tubos tan pequeños y estar secos nos resultara mucho más cómodo hacerlo en este orden, ya que si rehidratamos antes pueden convertirse en una masa de la que nos resultara complicado obtener la zona concreta que queremos observar.
En este punto cada autor tiene su propia técnica. Para el resto del hongo tanto cutícula como pie realizaremos el corte como hemos venido realizando con los hongos de láminas.